GB 5009.285-2022食品安全国家标准食品中维生素B12的测定，经历多年修订，于2022年6月30日正式发布，2022年12月30日正式实施。


适用范围：

本标准规定了食品中维生素B12的测定方法。

第一法：液相色谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品中维生素B12的测定

第二法：液相色谱-质谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品、即食谷物、烘焙食品、果冻、饮料中维生素B12的测定。

第三法：微生物法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品中维生素B12的测定。

 

01 为什么需要摄入和测定维生素B12？

维生素B12又名钴胺素，是一类含钴的咕啉类化合物的总称，维生素B12分子中的钴能和-CN、-OH、-CH3或5-脱氧腺苷等基团相连，形成羟基钴胺素 （Hydroxycobalamin）、氰基钴胺素（Cyanocobalamin）、 脱氧腺苷钴胺素（Deoxyadeno sylcobalamin）和甲基钴胺素（Methylcobalamin）。其中甲基钴胺参与体内甲基移换反应和叶酸代谢，是N5-甲基四氢叶酶甲基移换酶的辅酶。5-脱氧腺苷钴胺是甲基丙二酰辅酶 A 变位酶的辅酶，参与体内丙酸的代谢。

 

钴胺素B12

 

维生素B12缺乏可引起贫血、高同型半胱氨酸血症、神经精神疾病、生育与出生缺陷等。在新生儿期，维生素B12缺乏可严重损害神经系统的发育和功能，婴儿多表现为生长迟缓和神经系统的缺陷。婴儿一旦发生维生素B12缺乏，维生素B12的低水平将会至少持续1年。

维生素B12缺乏的常见原因可有：①摄入不足。②获得性吸收不良，如胰源性、胃源性、肝源性或肠源性疾病等。③对维生素B12需求量增加，如妊娠、产后、绦虫病等。④先天性维生素B12代谢步骤的障碍。⑤药源性缺乏。

《中国居民膳食营养素参考摄入量》中推荐的维生素B12摄入量：14岁以上人群为 2.4ug/d，1～14岁人群需控制在1.0～2.4ug/d，并随年龄增长；1岁以下为适宜 摄入量，半岁前为0.3ug·d-1，半岁后为 0.6ug/d

 

02 如何用液相法检测维生素B12？

样品提取

称取5g～10g试样（精确至0.01g）150ml具塞锥形瓶中，依次加入30ml乙酸钠缓冲液、0.2g胃蛋白酶、0.05g淀粉酶和2mL氰化钾（或氰化钠）溶液，充分混合。将样品溶液放入水浴恒温振荡器，在37℃，酶解30min（肉类样品酶解10h～16h），酶解后转入100℃水浴中，保持30min,取出冷却至室温。将样品溶液转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。移取上述溶液40mL至50mL离心管中，在10000r/min下离心10min，取上清液用玻璃纤维滤纸过滤后备用。

注：对于以氰钴胺素为营养强化剂，且本底不含有其他形式钴胺素的样品，在样品提取时可不使用氰化钾或氰化钠。

 

净化

免疫亲和柱：

Romer维生素B12免疫亲和柱，柱容量10μg以上

上样：

移取适量上述滤液过柱，调节过柱速度为1mL/min，待样液完全过柱后，用10ml水以稳定流速淋洗免疫亲和柱，抽干；

洗脱：

在免疫亲和柱下放置10mL玻璃试管，用3mL甲醇分３次洗脱，收集全部洗脱液；

氮吹：

在60℃以下用氮气流缓缓吹至近干，用0.04％三氟乙酸溶液定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.22μm滤膜过滤，待测。

注：氰化钾或氰化钠废液严禁与酸混合，可加入氢氧化钠调节pH>10，再加入高锰酸钾（按照废液质量的3%加入），使氰化物分解，放置24h后排放。

 

色谱条件

a) 色谱柱：ZORBAX StableBond C18, 4.6 x 150 mm, 5 µm

b) 流动相：A相，0.04%三氟乙酸溶液；B相，乙腈 ；

c) 梯度洗脱：0min～6.0min，90% A；6.0min～8.5min，90%～0% A;8.5min～14.0min，90% A；

d) 流速：0.8.0mL/min;

e) 柱温：40 ℃;

f) 进样量：100μL;

g) 紫外检测器检测波长：361mm。

 

图1：维生素B12标准的液相色谱图

 

03 相关产品订购指南

货号

产品描述

规格

10005409

B12 STAR 免疫亲和柱

25T

883975-902

ZORBAX StableBond C18, 4.6 x 150 mm, 5 µm

/

GMF-110-1.5

玻璃纤维滤纸，  110m*1.5um

100张