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GB 5009.285-2022食品安全国家标准食品中维生素B12的测定,经历多年修订,于2022年6月30日正式发布,2022年12月30日正式实施。
适用范围:
本标准规定了食品中维生素B12的测定方法。
第一法:液相色谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品中维生素B12的测定
第二法:液相色谱-质谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品、即食谷物、烘焙食品、果冻、饮料中维生素B12的测定。
第三法:微生物法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品中维生素B12的测定。
01 为什么需要摄入和测定维生素B12?
维生素B12又名钴胺素,是一类含钴的咕啉类化合物的总称,维生素B12分子中的钴能和-CN、-OH、-CH3或5-脱氧腺苷等基团相连,形成羟基钴胺素 (Hydroxycobalamin)、氰基钴胺素(Cyanocobalamin)、
脱氧腺苷钴胺素(Deoxyadeno sylcobalamin)和甲基钴胺素(Methylcobalamin)。其中甲基钴胺参与体内甲基移换反应和叶酸代谢,是N5-甲基四氢叶酶甲基移换酶的辅酶。5-脱氧腺苷钴胺是甲基丙二酰辅酶 A 变位酶的辅酶,参与体内丙酸的代谢。
钴胺素B12
维生素B12缺乏可引起贫血、高同型半胱氨酸血症、神经精神疾病、生育与出生缺陷等。在新生儿期,维生素B12缺乏可严重损害神经系统的发育和功能,婴儿多表现为生长迟缓和神经系统的缺陷。婴儿一旦发生维生素B12缺乏,维生素B12的低水平将会至少持续1年。
维生素B12缺乏的常见原因可有:①摄入不足。②获得性吸收不良,如胰源性、胃源性、肝源性或肠源性疾病等。③对维生素B12需求量增加,如妊娠、产后、绦虫病等。④先天性维生素B12代谢步骤的障碍。⑤药源性缺乏。
《中国居民膳食营养素参考摄入量》中推荐的维生素B12摄入量:14岁以上人群为
2.4ug/d,1~14岁人群需控制在1.0~2.4ug/d,并随年龄增长;1岁以下为适宜
摄入量,半岁前为0.3ug·d-1,半岁后为 0.6ug/d
02 如何用液相法检测维生素B12?
样品提取
称取5g~10g试样(精确至0.01g)150ml具塞锥形瓶中,依次加入30ml乙酸钠缓冲液、0.2g胃蛋白酶、0.05g淀粉酶和2mL氰化钾(或氰化钠)溶液,充分混合。将样品溶液放入水浴恒温振荡器,在37℃,酶解30min(肉类样品酶解10h~16h),酶解后转入100℃水浴中,保持30min,取出冷却至室温。将样品溶液转移至100mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。移取上述溶液40mL至50mL离心管中,在10000r/min下离心10min,取上清液用玻璃纤维滤纸过滤后备用。
注:对于以氰钴胺素为营养强化剂,且本底不含有其他形式钴胺素的样品,在样品提取时可不使用氰化钾或氰化钠。
净化
免疫亲和柱:
Romer维生素B12免疫亲和柱,柱容量10μg以上
上样:
移取适量上述滤液过柱,调节过柱速度为1mL/min,待样液完全过柱后,用10ml水以稳定流速淋洗免疫亲和柱,抽干;
洗脱:
在免疫亲和柱下放置10mL玻璃试管,用3mL甲醇分3次洗脱,收集全部洗脱液;
氮吹:
在60℃以下用氮气流缓缓吹至近干,用0.04%三氟乙酸溶液定容至1.0mL,涡旋30s溶解残留物,0.22μm滤膜过滤,待测。
注:氰化钾或氰化钠废液严禁与酸混合,可加入氢氧化钠调节pH>10,再加入高锰酸钾(按照废液质量的3%加入),使氰化物分解,放置24h后排放。
色谱条件
a) 色谱柱:ZORBAX
StableBond C18, 4.6 x 150 mm, 5 µm
b) 流动相:A相,0.04%三氟乙酸溶液;B相,乙腈 ;
c) 梯度洗脱:0min~6.0min,90% A;6.0min~8.5min,90%~0% A;8.5min~14.0min,90% A;
d) 流速:0.8.0mL/min;
e) 柱温:40 ℃;
f) 进样量:100μL;
g) 紫外检测器检测波长:361mm。
图1:维生素B12标准的液相色谱图
03 相关产品订购指南
货号 |
产品描述 |
规格 |
10005409 |
B12 STAR 免疫亲和柱 |
25T |
883975-902 |
ZORBAX
StableBond C18, 4.6 x 150 mm, 5 µm |
/ |
GMF-110-1.5 |
玻璃纤维滤纸,
110m*1.5um |
100张 |